§ 2. Методы и результаты селекции новых самоопыленных линий сорго
2.1. Подбор исходного материала и инцухт растений
В качестве исходного материала для создания самоопыленных линий используют селекционные, местные сорта, а также гибриды различных типов.
Для практической селекции у самоопыленных линий достаточная однородность растений наступает в пятом-шестом поколении самоопыления. Однако исследования З. И. Щелоковой (1969, 1974) показывают, что линии 3-кратного самоопыления по комбинационной способности не уступают аналогам 6-кратного самоопыления, а по продуктивности значительно выше последних, что очень важно для семеноводства гибридной кукурузы.
Для селекционера, работающего с сорго, важная задача состоит в создании инцухт-линий с генотипом, фенотипическое проявление которого было бы наиболее желательным. Имея в своем распоряжении большое разнообразие линий, различных по генетическому происхождению, можно ожидать проявления высокого эффекта гетерозиса у гибридов от их скрещивания. Однако не все сорта зернового и сахарного сорго при гибридизации передают потомству высокую урожайность и другие хозяйственно-полезные признаки. Это вызвало необходимость проводить селекционную работу на местном материале с целью создания самоопыленных линий, приспособленных к почвенно-климатическим условиям юга Украины и Северного Кавказа.
Цель исследований заключалась в выведении раннеспелых и среднеспелых самоопыленных линий, высокопродуктивных и с высокой комбинационной способностью. В 1935 г. В. Е. Писарев указывал, что нельзя ожидать хороших результатов при использовании случайного, мало приспособленного к данным условиям исходного материала. Нами на Генической опытной станции ВНИИ кукурузы (1961-1968) и Кубанской опытной станции ВИР (1972-1976) в качестве исходного материала для выведения новых самоопыленных линий сорго при гибридизации в первую очередь были использованы наиболее урожайные и с высокой комбинационной ценностью в условиях юга Украины и Северного Кавказа сорта и образцы коллекции ВИР и ВНИИ кукурузы.
Наибольший гетерозис у зернового сорго по урожаю зерна проявляют гибридные комбинации: кафрское X негритянское, кафрское X хлебное, кафрское X гвинейское, хлебное X негритянское; у сахарного сорго по урожаю силосной массы: кафрское X сахарное, сахарное X сахарное, сахарное X негритянское и сахарное X хлебное. Применяя в основном такие скрещивания на фертильной (путем кастрации цветков) и стерильной основе, мы получили много ценных гибридных комбинаций, из которых в дальнейшем создали самоопыленные линии с высокими комбинационными свойствами.
Техника кастрации цветков сводится к следующему. Перед скрещиванием, когда у материнского и отцовского растений начинают раскрываться первые цветки, среди растений материального образца отбирали наиболее подходящие по хозяйственно-ценным признакам здоровые метелки, сначала ножницами обрезали верхние и нижние ее веточки, в том числе и те, которые начали раскрываться. Оставшиеся веточки на середине метелки прореживали и пинцетом удаляли однополые мужские цветки. Сидячие двуполые цветки на метелке оставляли в нужном количестве (1000-1300 штук). После этого начиналась кастрация двуполых цветков притуплённой препаравальной иглой. Цветок помещался на указательный палец внутренней пленкой вниз, игла поддевалась под основание верхней пленки и легким боковым движением извлекались наружу слегка пожелтевшие три пыльника. Так кастрировался каждый цветок. Для предупреждения опыления кастрированных метелок пыльцой других сортов на них надевались открытые пергаментные изоляторы, сверху зажатые скрепкой, а снизу сравнительно туго завязанные шпагатом с двойной этикеткой, где с внутренней стороны отмечались номер делянки, рядка и растения, дата кастрации и номер делянки сорта-опылителя, с которым произведено скрещивание. Одновременно, в начале цветения изолировалось 3-5 метелок сорта-опылителя. Пыльцу наносили один раз через 3-4 дня после кастрации цветков. Собранная пыльца с изолированных метелок опылителя наносилась на кастрированную метелку через верхнюю открытую часть изолятора, который снова закрывался. При применении методики кастрации и опыления завязывание цветков было удачным, так как пыльцу наносили в момент наиболее активного пыльцеобразования с 5 до 9 ч. утра.
Так же мы проводили индивидуальный отбор и инцухтирование по зерновому и сахарному сорго без кастрации цветков на свободно опыляемых метелках и при опылении стерильных метелок.
У большинства видов и сортов сорго обычно преобладает перекрестное опыление между цветками одной метелки или между метелками (соцветиями) одного и того же сорта, но они легко переносят самоопыление, и депрессия в потомстве почти не наступает, а следовательно, полученные при этом семена не снижают своей жизненности и плодовитости, как это бывает у кукурузы. Однако, при отсутствии достаточной пространственной изоляции посевы отдельных форм сорго легко переопыляются между собой (Е. С. Якушевский, 1967). Поэтому мы проводили изолирование метелок лучших здоровых растений с помощью пергаментных изоляторов размером в основном 35x20 см.
Метелки будущей самоопыленной линии изолируют как только на ней начинают проявляться первые верхние цветки. Их срезают, последний лист отгибают и надевают закрытый изолятор, туго завязывая шпагатом с этикеткой.
В связи с тем, что у сорго цветки обоеполые, то в течение 5-7 дней созревшая под изолятором пыльца постепенно оплодотворяет рыльца завязи и образуются семена от самоопыления.
Самоопыление дает возможность разложить сорт-популяцию на отдельные генотипы, резко различающиеся между собой по ряду биологических свойств и признаков. При инцухтировании линия, достигшая определенной константности, переходит в гомозиготное состояние, сохраняет свои качества и передает их гибридам. При скрещивании растений, гетерозиготных по одному локусу Аа, в потомстве будет наблюдаться расщепление по формуле 1АА, 2Аа, 1аа или 25% АА, 50Аа и 25% аа. Инцухт обеспечивает элиминацию рецессивных генов с нежелательными признаками и позволяет создавать выравненные линии, используемые для выведения гетерозисных гибридов.
В. Е. Писарев (1935) отмечал, что инцухт является анализатором сложной перекрестно-опыляющейся популяции и дает селекционеру возможность выделить из нее в гомозиготном состоянии ряд генотипов, несущих ценные в практическом отношении признаки.
В работе "Генетика на службе социалистического земледелия" Н. И. Вавилов (1966) писал, что исследования инцухта у ржи и кукурузы обнаружили появление совершенно новых форм, выходящих за пределы не только видов, но даже родов, появление из обеполых форм однополых и т. д. Инцухт вскрывает большое разнообразие новых форм. Он может рассматриваться как один из факторов формообразования.
При создании самоопыленных линий сорго депрессия, хотя и не резко, но проявляется, и маскируется истинная ценность генотипов. Поэтому отбор самоопыленных линий следует проводить по фенотипическим признакам, а окончательную браковку-по комбинационной способности, по их способности проявлять в гибридах высокий эффект гетерозиса.
2.2. Методы создания самоопыленных линий
При выведении новых самоопыленных линий сорго мы применяем метод целенаправленной гибридизации, индивидуального отбора потомств в последующих поколениях и инцухтирование до наступления константности отдельных линий. Ежегодное самоопыление с применением многократного индивидуального отбора позволяет сравнительно быстро получить фенотипически выравненные линии.
В процессе исследований нами использовались следующие способы создания новых самоопыленных линий методом гибридизации и отбора:
Гибридизация на фертильной основе высокопродуктивных родителей зернового и сахарного сорго, один из которых является закрепителем стерильности, другой - восстановителем фертильности. Затем самоопыление и индивидуальный отбор фертильных форм.
Гибридизация на фертильной основе образцов зернового и сахарного сорго, когда оба родителя являются восстановителями фертильности. Затем самоопыление и отбор фертильных форм.
Гибридизация на стерильной основе образцов зернового и сахарного сорго, один из родителей которых является стерильной линией, другой - хорошим восстановителем фертильности. Гибридные растения при этом будут иметь стерильную цитоплазму. Затем самоопыление и отбор фертильных растений.
Гибридизация на стерильной и фертильной основе высокопродуктивных родительских форм зернового и сахарного сорго, не изученных по реакции на ЦМС. Затем самоопыление и отбор.
Индивидуальный отбор свободноопыляющихся метелок стерильных линий и фертильных форм. Затем отбор, оценка по фенотипу и реакции на ЦМС.
В первый год работы по созданию самоопыленных линий проводится кастрация метелок, затем скрещивание подобранных исходных родительских форм, в том числе стерильных метелок, а также отбор свободноопыляющихся метелок, материнскими формами которых являются высокопродуктивные сорта или стерильные линии зернового и сахарного сорго.
На второй год начиная с первого поколения, когда растения гибридных комбинаций по всем признакам выравнены, размещаем их отдельными рядками по 20-25 растений. Потомства, показавшие слабую жизнеспособность, выбраковываются, а на остальных самоопыляем по 8-10 лучших метелок (I1).
На третий год, во втором поколении, когда происходит расщепление на различные биотипы, проводится индивидуальный отбор и инцухтирование с целью формирования будущих самоопыленных линий. Для этого семена самоопыленных метелок высеваются отдельными рядами по 180-200 растений. Семьи с нежелательными признаками и депрессивные выбраковываются. Проводится также негативная браковка растений в хороших семьях. В остальных семьях самоопыляются 15-20 лучших растений для получения I2.
На четвертый год одна часть семян (I3) лучших самоопыленных метелок высевается в питомнике для продолжения работы по формированию самоопыленных линий, а другая используется для первичной оценки их общей комбинационной ценности и реакции на ЦМС. Для этого проводятся скрещивания с тестерами-анализаторами.
На пятый год работа ведется в двух направлениях: проводится дальнейший индивидуальный отбор наиболее ценных и жизнеспособных линий и самоопыление в них лучших растений (I4); изучаются гибриды, полученные от линий I3, с целью определения их комбинационной ценности и реакции на ЦМС.
На шестой год линии I5 становятся уже достаточно выравненными. На этом этапе работа также ведется в двух направлениях: продолжается дальнейший индивидуальный отбор лучших линий и их самоопыление, вторично испытываем гибриды от скрещивания линий с тестерами, чтобы определить их реакцию на ЦМС и комбинационную ценность.
На седьмой год на основе определения общей комбинационной ценности и реакции на ЦМС отбираются лучшие линии I6, которые включаются в диаллельные и топкроссные скрещивания для получения конкретных сочетаний, обеспечивающих получение при скрещивании высокогетерозисных гибридов (Н. А. Шепель, 1972).
Таким методом в течение ряда лет (1961-1979) нами создано 950 константных самоопыленных линий, в том числе зернового сорго - 685, сахарного-105 и суданской травы - 160, представляющих ценность для селекции на гетерозис (см. схему).
Схема создания самоопыленной линии сорго
Кроме описанного выше метода селекции самоопыленных линий сорго существуют еще методы периодического отбора, кумулятивной селекции, конвергентной селекции и отбора гамет (Н. В. Турбин, Л. В. Хотылева, 1966). Эти методы хорошо разработаны на кукурузе. Эффективность их по отношению к сорго в настоящее время не подтверждена объективными данными. Однако этот вопрос представляет большой научный интерес.
Создание константных самоопыленных линий - только первый этап в сложном процессе селекции гибридного сорго. Не менее важную задачу представляет собой определение комбинационной способности и реакции на ЦМС инцухт-линий. Оценка этих важнейших селекционных признаков может быть сделана только при испытании гибридов, полученных от этих линий.
2.3. Оценка новых самоопыленных линий по комплексу признаков
Так как самоопыленные линии созданы нами из гибридов, полученных от скрещивания различных видов сорго, процесс рекомбинации генов затрагивает наследственную основу обоих родительских компонентов, а следовательно, и реакция на ЦМС изменяется. В процессе инцухтирования будущих линий мы проводили индивидуальный отбор по морфобиологическим признакам таким образом, чтобы сохранить желаемый вид сорго.
Ниже приведена характеристика 174 самоопыленных линий сорго по реакции на ЦМС.
Данные таблицы 36 показывают, что 174 новых линий 92 (53%) оказались восстановителями фертильности, 22 (12,6%) закрепителями стерильности и 60 (34,4%) полувосстановителями. Разную реакцию на ЦМС показали линии кафрского, китайского и сахарного сорго. Среди линий гвинейского и негритянского сорго закрепителей стерильности нами не обнаружено. Больше всего восстановителей фертильности представлено линиями негритянского (90%) и хлебного (69%) сорго. Среди новых линий в сравнении с оригинальными образцами закрепителей стерильности оказалось несколько больше - 4,7% и полувосстановителей - на 1,7% а восстановителей фертильности меньше на 6,4% (см. табл. 32).
Таблица 36. Распределение новых самоопыленных линий сорго по реакции на ЦМС в условиях Юга Украины и Северного Кавказа (данные за 1965-1975 гг.)
Оценка самоопыленных линий по реакции на ЦМС позволяет планомерно включать восстановители фертильности в селекционную работу по выведению высокогетерозисных гибридов, а линии-закрепители стерильности и полувосстановители использовать для создания стерильных аналогов. Так, после 6-8 лет насыщающих скрещиваний нами созданы стерильные аналоги к новым линиям зернового сорго: Коричневозерное 481С, ГОС-24С, ГОС-64С, ГОС-65С, ГОС-66С, Южная 373С, Ингулка 113С, СК-77С, Азовка 83С, СК-34С, СК-23С, Искра 81С, СК-66С и сахарного-ГОС-11С, имеющие высокую стерильность. Они переданы в коллекцию ВИР.
Очень важно оценить новые самоопыленные линии зернового и сахарного сорго по комбинационной способности, это позволяет эффективно подобрать родительские пары для скрещивания. Изучая каждую самоопыленную линию, мы на протяжении ряда лет (1965-1975 гг.) скрещивали ее со многими стерильными линиями-тестерами. Полученные гибриды своей урожайностью характеризуют принадлежность самоопыленных линий к той или иной группе по общей комбинационной способности (табл. 37).
Таблица 37. Распределение новых самоопыленных линий сорго по общей комбинационной способности (данные за 1965-1975 гг.)
Из 159 изученных нами линий 80, или 50,0%, по продуктивности обладали высокой и очень высокой ОКС. Это дает возможность широко использовать их в селекционной работе для создания высокопродуктивных гибридов.
По общей комбинационной способности самоопыленные линии распределились следующим образом:
I. Низкая:
по гвинейскому сорго-Украинка 173;
по кафрскому сорго-ГОС-40, Таврида 166;
по хлебному сорго-ГОС-54, ГОС-43, Соната 127, Украинка 159;
по негритянскому сорго - Фетерита 204, ГОС-44, Орбита 79, Людмила 107, Солнечная 111, Венера 109, КУ-6;
по хлебному сорго - ГОС-57, ГОС-51, Энергия 116, Весна 117.
Самоопыление линии высокой и средней комбинационной ценности используются нами для создания высокопродуктивных гибридов зернового, сахарного сорго и сорго-суданковых гибридов. Наиболее ценные в комбинационном отношении линии по зерновому сорго: Людмила 107, Ранняя 28, Искра 1С, Низкорослое 80С, Сарваши С; по сахарному: ГОС-11С; по суданской траве: Кубанская 183 и Сочностебельная 2 являются родительскими компонентами районированных гибридов зернового сорго Кубанский 10, Россорго 4, Зерноград 8, сорго-суданковых гибридов Новатор 151, Северокавказский 5, Надежный и Сочностебельный 3.
Данные таблиц 38 и 39 показывают, что гибриды, созданные с участием новых самоопыленных линий зернового сорго с высокой комбинационной способностью и сахарного сорго с высокой и средней КС, в определенных сочетаниях проявляют высокий гетерозис в сравнении с отцовскими компонентами и стандартами. Эти и многие другие продуктивные гибриды являются перспективными для дальнейшего изучения и внедрения в производство, а самоопыленные линии (их отцовские компоненты) представляют ценный материал для дальнейшей селекции на гетерозис.
Таблица 38. Продуктивность новых самоопыленных линий зернового сорго и их гибридов (данные за 1965-1969 гг.)
Таблица 39. Продуктивность новых самоопыленных линий и их гибридов силосного сорго (данные за 1965-1969 гг.)
Характерно, что гибриды, созданные на стерильной основе, в первом поколении обладают, как и их исходные формы, хорошей выравненностью по высоте растений, что очень важно для зернового сорго при комбайновой уборке.
Наши исследования подтверждают, что при соответствующем подборе линий для скрещивания эффект гетерозиса у гибридов наблюдается не только при развитии морфологических признаков, но и биохимических.
Проведенный лабораторией кормоиспользования ВНИИ кукурузы биохимический анализ зерна у девяти новых самоопыленных линий показал, что они содержат сравнительно высокий процент белка (12,19-16,55%). Особенно много белка содержат те линии, которые переведены на стерильную основу (ГОС-24С, ГОС-64С, ГОС-65С, Южная 373С). Они на 27-37% превышают стандарт-районированный сорт Кубанское красное 1677. Некоторые самоопыленные линии передают потомству высокое содержание белка. Так, гибридная комбинация Коричневозерное 481СХ Таврическое 105 содержит больше белка, чем ее родительские формы, тогда как Низкорослое 81СХ Таврическое 105, где участвует тот же отцовский компонент, содержит белка меньше, чем исходные формы.
Гибриды, полученные от скрещивания самоопыленных линий ГОС-39 и Белозерное 133 со стерильной линией Низкорослое 81С, содержали белка в зерне больше, чем отцовские формы, но меньше, чем материнская стерильная линия, а гибриды высокобелковых линий Низкорослое 81С и Кремовозерное 530 содержали белка меньше, чем исходные формы. Следовательно, полученные гибридов со сравнительно высоким процентом белка в зерне возможно при определенном сочетании родительских форм.
Наиболее перспективные линии зернового и сахарного сорго с высокой комбинационной ценностью, представляющие значительный интерес для использования в селекционной работе, переданы в ВИР для регистрации и пополнения коллекции.
Таким образом, гибридизация и многократный индивидуальный отбор в сочетании с инцухтированием дают возможность создавать исходный материал - ценные по общей комбинационной способности и хозяйственно-полезным признакам самоопыленные линии для выведения новых гибридов сорговых культур. Такой метод селекции линий на данном этапе наиболее эффективен. Особенно резко усиливается формообразовательный процесс, когда в скрещивание включаются генетически отдаленные образцы.
Результаты проведенной нами работы по селекции новых самоопыленных линий показали, что при большом количестве гибридных растений, подвергнутых самоопылению во втором поколении, эффективность работы по выведению ценных линий повышается. Поэтому целесообразно самоопылять по 200 и более растений у каждого гибрида. В процессе селекции самоопыленных линий необходимо проводить строгий индивидуальный отбор лучших потомств и жесткую браковку по комплексу признаков, так как без этого быстро увеличивается количество форм, в том числе малоценных, и трудно дать всестороннюю оценку селекционному материалу.
2.4. Создание аналогов-восстановителей фертильности
Большую исследовательскую работу по созданию аналогов-восстановителей фертильности по культуре сорго провели селекционеры Б. Н. Малиновский (1966) и Н. С. Калашник (1969). Теоретической предпосылкой и практическим обоснованием этой работы послужили исследования, проведенные на кукурузе. Доказано, что восстановительная способность может быть придана любой линии, если даже она ранее не обладала этим свойством (Г. С. Галеев, 1962, М. И. Хаджинов, 1967).
Существует два метода создания аналогов-восстановителей фертильности - на стерильной и на фертильной основе.
Б. Н. Малиновский (1966) описывает метод и приводит схему создания аналога-восстановителя фертильности ВИР-2 на стерильной основе. При этом в продуктах насыщения легко обнаруживаются формы, обладающие восстановительной способностью. В их потомствах все стерильные растения бракуются.
Н. С. Калашник (1969) применял различные схемы создания аналога-восстановителя: на фертильной и стерильной основе, методом прямых и обратных насыщающих скрещиваний.
При создании аналогов-восстановителей фертильности мы, используя опыт Г. С. Галеева (1962), после 3-4 лет насыщающих скрещиваний создали аналоги-восстановители фертильности по сорту зернового сорго Низкорослое 93 (Н. А. Шепель, 1966). Отбор аналога-восстановителя проводили в старших поколениях насыщения путем самоопыления восстановительных растений. При этом уже в третьем поколении насыщения все семьи вышеуказанного сорта были полностью фертильными и по морфологическим признакам сходны с оригинальным сортом.
Заслуживает внимания создание аналогов-восстановителей у сортов, неоднородных по свойству восстановления фертильности, т. е. являющихся неполными восстановителями. Методика создания аналога-восстановителя в этом случае основывается на самоопылении метелок 25-30 растений образца, из которого планируется создать аналог. Затем пыльцу от каждой самоопыленной метелки наносят на метелки стерильных линий. На следующий год гибридные потомства оценивают под изоляторами по реакции на ЦМС. Опылитель, потомство которого имело полную фертильность, является готовым аналогом-восстановителем. Применяя такой метод, мы создали аналоги-восстановители для перспективных линий Чернопленчатая 1, Комплексная 138 и сорта Сарваши, широко используемых нами в гибридизации.